Princip Oligo Sintesajzera
U područjima molekularne biologije i genetičkih istraživanja, sposobnost sintetiziranja DNK igra ključnu ulogu.Sinteza DNA uključuje umjetnu proizvodnju molekula DNA raspoređivanjem nukleotida određenim redoslijedom.Kako bi to postigli, znanstvenici se oslanjaju na snažan alat poznat kao sintetizator oligonukleotida, također poznat i kao sintetizator DNK.
Sintetizator oligonukleotida je sofisticirani instrument koji automatski sintetizira kratke molekule DNK koje se nazivaju oligonukleotidi.Ovi kratki lanci DNK obično su dugi 10 do 100 nukleotida i ključni su građevni blokovi u širokom spektru primjena uključujući lančanu reakciju polimerazom (PCR), sintezu gena, genetski inženjering i sekvenciranje DNK.
Sintetizatori oligonukleotida rade na principu tehnike poznate kaosinteza čvrste faze.Ovu je metodu prvi uveo dobitnik Nobelove nagrade dr. Marvin Caruthers 1970-ih, a tijekom godina je usavršavana kako bi se poboljšala sinteza sekvenci DNK.Sinteza oligonukleotida provodi se postupnim dodavanjem nukleotidnih ostataka na 5'-završetak rastućeg lanca dok se ne sastavi željena sekvenca.Svaki dodatak naziva se ciklus sinteze i sastoji se od četiri kemijske reakcije:
Korak 1: Deblokiranje (detritilacija)---------Korak 2: Spajanje---------Korak 3: Ograničenje-----------Korak 4: Oksidacija
Ovaj proces se ponavlja za svaki nukleotid dok se ne dobije željena sekvenca.Za duže oligonukleotide, ovaj ciklus će možda trebati ponoviti nekoliko puta da se sintetizira cijeli niz. Sposobnost precizne kontrole svakog koraka ciklusa sinteze ključna je za sintetizator oligonukleotida.Korišteni reagensi, kao što su nukleotidi i aktivatori, moraju biti visoke kvalitete kako bi se osigurala točna i učinkovita sinteza.Osim toga, sintesajzeri zahtijevaju visokopreciznu kontrolu temperature i druge uvjete okoline kako bi se potaknule željene reakcije spajanja i spriječile neželjene reakcije.
Nakon što je oligonukleotid u potpunosti sintetiziran, tipično se odvaja od čvrste podloge i pročišćava kako bi se uklonile sve preostale zaštitne skupine ili nečistoće.Pročišćeni oligonukleotidi su tada spremni za daljnju primjenu.
Napredak tehnologije omogućio je razvoj visokoučinkovitih sintetizatora oligonukleotida koji mogu istovremeno sintetizirati stotine ili čak tisuće oligonukleotida.Ovi instrumenti koriste tehnologiju sinteze temeljenu na mikromrežama, omogućujući istraživačima brzo generiranje velikih biblioteka oligonukleotida za razne istraživačke svrhe.
Ukratko, principi iza sintetizatora oligonukleotida vrte se oko tehnika sinteze čvrste faze, koje uključuju postupno dodavanje nukleotida na čvrstu podlogu.Precizna kontrola ciklusa sinteze i visokokvalitetni reagensi bitni su za točnu i učinkovitu sintezu.Oligo sintetizatori igraju vitalnu ulogu u istraživanju DNK, omogućujući znanstvenicima da generiraju prilagođene oligonukleotide za različite primjene, pridonoseći napretku u biotehnologiji i genetskom istraživanju.
Vrijeme objave: 1. kolovoza 2023