Osnovni princip sinteze DNA

Kemijska sinteza DNA temelji se na strategiji sinteze čvrste faze i kemiji fosforamidita.Za razliku od biološke sinteze DNA, materijal u kemijskoj sintezi DNA je DMT (4, 4-dimetoksitritil) i dezoksiriboksizid modificiran fosforamiditom, kao što je prikazano na slici 1. Sinteza DNA se provodi na čvrstoj podlozi (možemo ponuditi različiteOligosintezna kolona), tj. CPG (staklo s kontroliranim porama) i PS (polistiren), a cijela sinteza se izvodi naDNA/RNA sintetizator, koji je naša glavna oprema, ima različite modele kao što su: HY jednokanalni sintesajzer, HY-12, HY-192 itd., smjer sinteze je od 3' do 5', a nukleotid se uvodi u čvrsti nosač putem jednog ciklus sinteze.Tipični ciklus sinteze sadrži četiri koraka, uklanjanje zaštite, spajanje, zatvaranje i oksidaciju (Slika 2).Deprotekcija je postavljena da ukloni DMT skupinu na čvrstom nosaču ili 5' hidroksilnu skupinu na prethodnom nukleozidu, 3% trikloroctena kiselina u diklormetanu koristi se kao reagens za deprotekciju.Zatim je fosforamiditom modificiranom deoksiriboksizidu dopušteno da izloži hidroksilnu skupinu uz pomoć aktivatora, tj. 5-etiltiotetrazola ili 4,5-dicijanoimidazola, tvoreći fosfitriester (III), i realiziran je korak spajanja.Korak zatvaranja provodi se kako bi se blokirala neizreagirana hidroksilna skupina tijekom koraka spajanja, kako bi se smanjilo stvaranje neželjenih defektnih sekvenci.Konačno, nestabilni fosfortriester (III) oksidira se u kemijski stabilni fosfortriester (V) s jodom kao oksidansom u prisutnosti piridina.

Sintetizirana DNA može se odcijepiti od čvrste podloge aminolizom, 2-cijanoetil zaštićena skupina na fosfortriesteru i amid na nukleobazi se cijepaju u isto vrijeme, ploče za sintezu i kolone za sintezu u nosačima postavljaju se izravno u reakcijsku komoru odOprema za uklanjanje zaštite.Sirova DNK može se pripremiti HPLC-om, elektroforezom i OPC-om na zahtjev, također vam možemo pružitiOprema za pročišćavanjeza naknadnu obradu.